منتجات

الطريقة التي تتحد بها تأثيرات الطفرات المتزامنة لتغيير النشاط الأنزيمي لا يمكن التنبؤ بها بسهولة لأن هذه التأثيرات ليست مضافة دائمًا بطريقة خطية.ومن ثم ، فإن توصيف تأثيرات الطفرات المتزامنة لبقايا الأحماض الأمينية التي تربط الركيزة يمكن أن تقدم مساهمة كبيرة في فهم خصوصية الركيزة للأنزيمات.في بيتا جليكوزيداز من Spodoptera frugiperda (Sfbetagly) ، تتفاعل كلا البقايا Q39 و E451 مع الركيزة وهذا ضروري لتحديد خصوصية الركيزة.تم تحضير طفرات مزدوجة من Sfbetagly (A451E39 و S451E39 و S451N39) عن طريق الطفرات الموجهة من الموقع ، والتي يتم التعبير عنها في البكتيريا وتنقيتها باستخدام كروماتوجرافيا التقارب.تم وصف هذه الإنزيمات باستخدام p-nitrophenyl beta-galactoside و p-nitrophenyl beta-fucoside كركائز.تم استخدام نسبة k cat / Km للطفرات المفردة والمزدوجة لـ Sfbetagly التي تحتوي على طفرات موجهة للموقع في الموضعين Q39 و E451 لإثبات أن التأثير على الطاقة الحرة للخنجر المزدوج (مجمع حالة انتقال الإنزيم) للطفرات المزدوجة (Gdouble daggerxy) ليس مجموع التأثيرات الناتجة عن الطفرات الفردية (Gdouble daggerx و Gdouble daggery).يشير هذا الاختلاف في خنجر Gdouble إلى أن تأثيرات الطفرات المفردة تتداخل جزئيًا.ومن ثم ، فإن هذا التأثير الشائع يحسب مرة واحدة فقط في Gdouble daggerxy.تكشف البيانات البلورية على بيتا جليكوسيدازات عن وجود رابطة هيدروجين ثنائية السِّنّ تشمل بقايا Q39 و E451 ونفس مجموعة الهيدروكسيل في الركيزة.لذلك ، تشير كل من البيانات الديناميكية الحرارية والبيانات البلورية إلى أن البقايا Q39 و E451 تمارسان تأثيرًا متبادلًا على تفاعلات كل منهما مع الركيزة.