منتجات

تمت دراسة طوبولوجيا الغشاء لمجال قناة colicin E1 عن طريق نقل طاقة الرنين الفلوري (FRET).تضمنت الحنق حمض أميني فلورسنت مشفر وراثيًا (كومارين) كمتبرع وبقايا سيستين ذات علامات انتقائية مرتبطة بـ DABMI (4- (ديميثيلامينو) فينيلازوفينيل-4'-مالييميد) كمتقبل FRET.تم دمج بقايا الكومارين الفلورية في البروتين عبر زوج توليف tRNA / aminoacyl-tRNA المتعامد والذي سمح بإدماج انتقائي في أي موقع داخل مجال قناة colicin.كان لكل متغير طفرة توقف (TAG) لتضمين الكومارين وطفرة سيستين (TGT) لمرفق DABMI.تم تحديد ستة مسافات بين الحلزونات داخل الحلزونات 1-6 باستخدام تحليل FRET لكل من الحالات القابلة للذوبان والمرتبطة بالغشاء.أظهرت بيانات FRET تغييرات كبيرة في المسافات البينية بين الحلزونات 3-6 عند ارتباط الغشاء مما يوفر رؤية جديدة للهيكل المرتبط بالغشاء لمجال القناة.بشكل عام ، انخفضت الكفاءات بين الحلقات الكومارين- DABMI FRET عند ربط الغشاء ، بناءً على نموذج المظلة لقناة الكولسين.تم تطوير نموذج مؤقت للحالة المغلقة لمجال القناة بناءً على بيانات FRET الحالية والمنشورة مسبقًا.يقترح النموذج ترتيبًا دائريًا للحلزونات من 1 إلى 7 في اتجاه عقارب الساعة من الجانب خارج الخلية والترابط البيني للغشاء من الحلزونات 1 و 6 و 7 و 10 حول دبوس الشعر الغشائي المركزي المكون من الحلزونات 8 و 9.