منتجات

مقايسة كروماتوغرافيا سائلة جديدة عالية الأداء لـ glycosyltransferases على أساس الاشتقاق باستخدام حمض الأنثرانيليك والكشف عن التألق.

تم تطوير الاختبارات باستخدام كيمياء وضع العلامات الفريدة لحمض 2-أمينوبنزويك (2AA ؛ حمض أنثرانيليك ، AA) لقياس أنشطة كل من β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) و α2-6 sialyltransferase (ST-6) بواسطة سائل عالي الأداء كروماتوغرافيا (HPLC) مع الكشف عن التألق (Anumula KR. 2006. التطورات في طرق اشتقاق التألق لتحليل كروماتوجرافي سائل عالي الأداء لكربوهيدرات البروتين السكري. الكيمياء الحيوية الشرجية. 350: 1-23).تم استخدام N-Acetylglucosamine (GlcNAc) و N-acetyllactosamine كمقبلات و uridine diphosphate (UDP) -Galactose و cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic acid (NANA) كمانحين لـ GalT-1 و ST-6 ، على التوالي.تم تمييز المنتجات الأنزيمية في الموقع باستخدام AA وتم فصلها عن الركائز على عمود TSKgel Amide 80 باستخدام ظروف الطور الطبيعي.تم تحديد وحدات الإنزيم من مناطق الذروة بالمقارنة مع المعايير المشتقة بشكل متزامن Gal-β1-4GlcNAc و NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.تم إنشاء الخطية (الوقت وتركيز الإنزيم) ، والدقة (داخل و interassay) والتكاثر للمقايسات.تم العثور على الاختبارات لتكون مفيدة في مراقبة أنشطة الإنزيم أثناء العزل والتنقية.كانت الاختبارات حساسة للغاية وأجريت مساوية أو أفضل من القياسات التقليدية القائمة على السكر المشع.يمكن أيضًا استخدام تنسيق الفحص لقياس نشاط النقلات الأخرى ، بشرط أن تحتوي متقبلات الكربوهيدرات على نهاية مختصرة للوسم.تم تطوير اختبار لمستقبلات البروتين السكري باستخدام IgG.تم تطوير طريقة قصيرة لتحديد سمات HPLC لفصل IgG glycans (biantennary G0 و G1 و G2 و mono- و disialylated) ، مما سهّل تحديد أنشطة GalT-1 و ST-6 بطريقة سريعة.علاوة على ذلك ، يجب أن تكون طريقة التنميط هذه مفيدة لرصد التغييرات في IgG glycans في الإعدادات السريرية.