منتجات

تنظم فسفرة البروتين الوظائف الخلوية المتنوعة وتلعب دورًا رئيسيًا في التطور المبكر للنباتات.لاستكمال وتوسيع التحقيقات السابقة حول فسفرة البروتين في شتلات نبات الأرابيدوبسيس ، استخدمنا نهجًا بديلًا يجمع بين استخراج البروتين في ظل ظروف غير متغيرة الطبيعة مع كروماتوغرافيا تقارب أيونات معدنية ثابتة (IMAC) وإثراء البروتينات الفوسفورية السليمة في المستخلصات المستنفدة من Rubisco ، متبوعًا بتحديد الهوية باستخدام الرحلان الكهربائي للهلام ثنائي الأبعاد (2-DE) ومقياس الطيف الكتلي اللوني السائل (LC-MS / MS).حدد هضم التربسين في الجل وتحليل بقع الهلام المحددة 144 ببتيدًا ومخلفات فسفرة ، تم العثور على 18 منها فقط من الببتيدات الفوسفاتية و 8 فوسفوسيتات في قواعد بيانات موقع PhosPhAt 4.0 و P3DB Arabidopsis thaliana phosphorylation.شارك أكثر من نصف البروتينات الفوسفورية البالغ عددها 82 بروتينًا في استقلاب الكربوهيدرات أو التمثيل الضوئي / التنفس أو آليات استجابة الإجهاد التأكسدي.يبدو أن إثراء البروتينات الفسفورية السليمة قبل 2-DE و LC-MS / MS يعزز اكتشاف بقايا ثريونين وتيروزين الفسفرة مقارنة بالطرق التي تستخدم الإثراء على مستوى الببتيد ، مما يشير إلى أن النهجين مكملان إلى حد ما من حيث تغطية موقع الفسفرة.حددت مقارنة نتائج الشتلات الصغيرة مع تلك التي تم الحصول عليها سابقًا لأوراق نبات الأرابيدوبسيس الناضجة خمسة بروتينات يتم فسفرتها تفاضليًا في هذه الأنسجة ، مما يدل على إمكانات هذه التقنية للتحقيق في ديناميات فسفرة البروتين أثناء نمو النبات.