منتجات

لقد أبلغنا مؤخرًا أن نيوكليوتيد البيرين يتم إدخاله بشكل تفضيلي مقابل موقع أسيوي ، وهو 3'-T لثايمر الثايمين ، ومعظم القواعد غير التالفة بواسطة الخميرة DNA polymerase eta (pol eta).نظرًا لأن البيرين عبارة عن جزيء غير قطبي بدون قدرة على الارتباط بـ H ، فإن الكفاءات العالية غير المعتادة لإدخال dPMP تُعزى إلى قدرتها الفائقة على التراص الأساسي ، وتؤكد أهمية التراص الأساسي في اختيار النيوكليوتيدات بواسطة pol eta.للتحقيق في دور الرابطة H وهندسة الزوج الأساسي في اختيار النيوكليوتيدات بواسطة pol eta ، حددنا كفاءات الإدراج للنيوكليوتيدات المعدلة الأساسية 2،6-ديامينوبورين ، 2-أمينوبورين ، 6-كلوروبورين ، والإينوزين والتي من شأنها قم بعمل عدد مختلف من روابط H مع قاعدة القالب اعتمادًا على هندسة الزوج الأساسي.يبدو أن اقتران قاعدة Watson-Crick يلعب دورًا مهمًا في اختيار نظائر النيوكليوتيدات للإدخال المقابل لـ C و T كما يتضح من الانخفاض في كفاءات الإدراج النسبية مع انخفاض عدد روابط Watson-Crick H وزيادة في عدد التفاعلات بين المانحين والمتقبلين.تكون انتقائية إدخال النوكليوتيدات أكبر مقابل 5'-T من 3'-T من ثايمين الثايمين ، وفقًا للعمل السابق الذي يشير إلى أن 5'-T يتم تثبيته بشكل أكثر صرامة من 3'-T.علاوة على ذلك ، يبدو أن إدخال A مقابل كل من Ts للديمر يتم توسطه عن طريق اقتران قاعدة Watson-Crick وليس عن طريق الاقتران الأساسي Hoogsteen استنادًا إلى كفاءات الإدراج المتطابقة تقريبًا لـ A و 7-deaza-A ، الأخير الذي يفتقر إلى H- القدرة على الترابط في N7.الكفاءات النسبية لإدخال النيوكليوتيدات التي يمكن أن تشكل أزواج قاعدة Watson-Crick موازية لتلك الخاصة بجزء Klenow ، في حين أن جزء Klenow يميز بقوة أكبر ضد عدم التطابق ، بما يتوافق مع انتقائية الشكل الأكبر.تؤكد هذه النتائج على أهمية الترابط H وهندسة زوج قاعدة Watson-Crick في اختيار النيوكليوتيدات بواسطة كل من pol eta وجزء Klen ow ، والدور الأقل لاختيار الشكل في الإدراج بواسطة pol eta نظرًا لأنه أكثر انفتاحًا وأقل موقع نشط مقيد.