منتجات

لا يزال تحليل أحداث الفسفرة على مستوى البروتين يمثل تحديًا تحليليًا كبيرًا بسبب التعقيد الهائل لشبكات فسفرة البروتين.في هذا العمل ، نقوم بتقييم تكامل Lys-N و Lys-C و trypsin فيما يتعلق بقدرتها على المساهمة في التحليل العالمي للبروتين الفوسفوري.تم استخدام نسخة مكررة من التبادل الكاتيوني القوي منخفض الأس الهيدروجيني لفصل الببتيدات المؤكسدة بالفوسفور وغير المعدلة بشكل فعال.يمكن تحديد إجمالي 5036 من الببتيدات الفوسفورية غير الاحتياطية بمعدل اكتشاف خاطئ أقل من 1٪ من 1 ملغ من البروتين باستخدام مزيج من الإنزيمات الثلاثة.كشفت بياناتنا أن التداخل بين مجموعات بيانات الفوسفوببتيد التي تم إنشاؤها باستخدام بروتياز مختلفة كان هامشيًا ، في حين تم العثور على التداخل بين مجموعتين من مجموعات البيانات التجريبية المتشابهة 4 مرات على الأقل.وبهذه الطريقة ، أتاح الاستخدام الموازي لـ Lys-N و trypsin زيادة بنسبة 72٪ في عدد الفوسفوببتيدات المكتشفة مقارنة بـ d بالتريبسين وحده ، بينما أدت تجربة تكرار التربسين إلى زيادة بنسبة 25٪ فقط.وبالتالي ، عند التركيز فقط على بيانات التربسين و Lys-N ، حددنا 4671 فوسفوببتيد غير مكرر.أظهر التحليل الإضافي للمواقع المكتشفة أن مجموعات بيانات Lys-N و trypsin قد تم إثرائها في أشكال فسفرة مختلفة بشكل كبير ، مما يدل على أن مناهج تعدد البروتياز ذات قيمة كبيرة في تحليلات البروتينات الفوسفورية.