منتجات

إن بروتين ORF45 من فيروس الهربس المرتبط بساركوما كابوزي (KSHV) هو بروتين فوري مبكر مبكر خاص بفيروس هربس غاما.كشفت دراساتنا السابقة عن أدوارها الحاسمة في كل من المراحل المبكرة والمتأخرة من عدوى KSHV.في هذه الدراسة ، قمنا بمسح التفاعل التفاعلي لـ ORF45 باستخدام لوحة من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة.بالإضافة إلى بروتينات كيناز منظم خارج الخلية (ERK) وبروتينات الريبوسوم S6 كيناز (RSK) التي تم تحديدها سابقًا ، وجدنا العديد من البروتينات المشتركة الأخرى ، بما في ذلك البروتينات البارزة ∼38 كيلو دالتون و ∼130 كيلو دالتون.كشف قياس الطيف الكتلي أن البروتين 38 كيلو دالتون هو ORF33 الفيروسي وأن البروتين 130 كيلو دالتون هو USP7 الخلوي (البروتياز الخاص باليوبيكويتين 7).لقد قمنا بتعيين مجال ربط ORF33 إلى الأحماض الأمينية الكربوكسيل 19 المحفوظة للغاية (aa) لـ ORF45 ومجال ربط USP7 إلى نموذج الإجماع المبلغ عنه في المنطقة الوسطى من ORF.باستخدام تلطيخ التألق المناعي ، لاحظنا تمركز ORF45 مع ORF33 أو USP7 تحت أيونات الشرط المنقولة وفي الخلايا المصابة بـ KSHV.علاوة على ذلك ، لاحظنا إعادة توطين تعتمد على ORF45 لجزء من ORF33 / USP7 من النواة إلى السيتوبلازم.لقد وجدنا أن ORF45 تسبب في زيادة تراكم البروتين ORF33 الذي تم إلغاؤه إذا تم حذف مجال ربط ORF33- أو USP7 في ORF45.علاوة على ذلك ، أدى حذف نهاية الكربوكسيل المحفوظة لـ ORF45 في جينوم KSHV إلى خفض مستوى بروتين ORF33 بشكل كبير في الخلايا المصابة بـ KSHV وإلغاء إنتاج فيروسات النسل.بشكل جماعي ، لا تكشف نتائجنا عن المكونات الجديدة لـ ORF45 التفاعلي فحسب ، بل توضح أيضًا أن التفاعلات بين هذه البروتينات ضرورية لتكاثر KSHV lytic.KSHV ORF45 هو بروتين متعدد الوظائف مطلوب لتكاثر KSHV lytic ، لكن الآليات الدقيقة التي يؤدي بها ORF45 وظائفه الحرجة غير واضحة.كشفت دراساتنا السابقة أن كل بروتين ORF45 في الخلايا موجود في مجمعات عالية الوزن الجزيئي.لذلك سعينا إلى توصيف التفاعل لـ ORF45 لتقديم نظرة ثاقبة لأدواره أثناء النسخ المتماثل.باستخدام لوحة من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ، قمنا بمسح تفاعل ORF45 في الخلايا المصابة بـ KSHV.حددنا شريكين ملزمين جديدين لـ ORF45: البروتين الفيروسي ORF33 والبروتياز 7 الخاص باليوبيكويتين الخلوي (USP7).نوضح كذلك أن التفاعل بين ORF45 و ORF33 أمر بالغ الأهمية للإنتاج الفعال للجزيئات الفيروسية KSHV ، مما يشير إلى أن التداخل المستهدف مع هذا التفاعل قد يمثل استراتيجية جديدة لمنع التكرار التحليلي لـ KSHV.